Глицирризин корней лакричника. Исследования японских ученых. Часть 1

Глицирризин корней лакричника. Исследования японских ученых. Часть 1

ДИКАЛИЙ ГЛИЦИРРИЗИНАТ (Глицирризин корней лакричника). Исследования японских ученых.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Введение……………………………………………………………………….

2. Фармакология и действие

(1) Поверхностная активность………………………………………………..
(2) Противоязвенная активность……………………………………………..
(3) Эффект ингибирования высвобождения гистамина…………………….

1) Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты
на антиген-специфическое высвобождение гистамина…………..
2) Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты
на высвобождение гистамина, индуцированное
Компаундом 48/80…………………………………………………..

(4) Противовоспалительные эффекты……………………………………….
1) Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты
на каскад арахидоновой кислоты………………………………….

1. Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты
на продукцию LTB4 клетками перитонеального
эксудата крыс……………………………………………………
2. Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты
на продукцию PGE2 клетками перитонеального
эксудата крыс……………………………………………………

2) Эффект ингибирования активности гиалуронидазы……………..
3) Влияние на эритему, вызванную ультрафиолетовым
облучением………………………………………………………….
4) Влияние на DNCB-контактную сенсибилизацию………………..

3. Принцип действия. Противовоспалительная активность…………….

4. Абсорбция и экскрекция……………………………………………………

5. Тесты на безопасность………………………………………………………

(1) Кожная аллергическая проба (пач-тест)…………………………………
(2) Пищевая токсичность (на мышах)……………………………………….

6. Клинические исследования………………………………………………..

(1) Противовоспалительное действие на кожу человека
дикалий глицирризината в составе раствора для
химической завивки………………………………………………………
(2) Лечение атопического дерматита дикалий
глицирризиновой мазью………………………………………………….

1. Введение.



Количественный анализ сухого продукта показывает, что содержание в нем дикалий глицирризината (С42 Н60 К2 О16) составляет 96~102%.

Метод производства:

Измельченные корни лакричника экстрагируют водой при низкой температуре. К полученному экстракту добавляют этиловый спирт, преципитат отделяют после седиментации. К фильтрату добавляют неорганическую кислоту, осадок фильтруют. После нейтрализации водой фильтрат растворяют в растворе гидроксида калия и выпаривают до получения сухого остатка. Сухой остаток рекристаллизуют, например, уксусной кислотой или этиловым спиртом, получают монокалий глицирризинат.

Монокалий глицирризинат растворяют в рассчитанном количестве гидроксида калия, получают дикалий глицирризинат, который высушивают выпариванием.

Свойства:

Дикалий глицирризинат – белый слегка желтоватый кристаллический порошок без запаха, с характерным сладким вкусом.

Действие:

В многочисленных клинических и фармакологических исследованиях были подтверждены кортикоидная (DOCA активность, увеличение активности глюкокортикоидов), противоядная (дифтерийный токсин, столбнячный токсин, тетодороксин), противоаллергическая, снижение уровня холестерина, противоязвенная активности дикалий глицирризината. Кроме того, дикалий глицирризинат обладает поверхностно-активными свойствами.

Использование:

Во многих клинических докладах, как в Японии, так и в других странах, сообщается об использовании данного продукта в медицине в качестве средства для наружного применения в дерматологии, которая очень близко соотносится с косметологией. Лекарственные средства на основе дикалий глицирризината весьма эффективны в лечении острых и хронических дерматитов.

Его действие слабее, чем у адренокортикальных гормонов, и немедленного эффекта также не следует ожидать. Однако при длительном применении дикалий глицирризината практически не наблюдается побочных эффектов, а благодаря его химической стабильности, хорошей растворимости и эмульгирующим свойствам, дикалий глицирризинат широко используется в косметической промышленности. Также его часто используют в качестве подсластителя в лекарственных средствах для наружного и внутреннего применения.

Растворимость:



Ο: Полностью растворим
∆: Частично растворим
Х: Не растворим

Стабильность:
Данный продукт обладает относительно высокой гигроскопичностью.

При капельном добавлении неорганической кислоты в водный раствор дикалий глицирризината при рН ниже 4 происходит желирование.

Хотя дикалий глицирризинат проявляет высокую стабильность к нагреванию, он начинает распадаться при нагревании выше 100ºС в течение длительного времени.

2. Фармакология и действие.

(1) Поверхностная активность

Yonezawa и соавторы измеряли поверхностное натяжение дикалия глицирризината при постоянных рН и ионной силе раствора. Результаты измерений показали, что величина поверхностного натяжения снижается с увеличением концентрации дикалия глицирризината подобно другим известным поверхностно активным веществам. При высоких концентрациях данная величина остается практически постоянной. Кроме того, на основании экстраполированной точки пересечения была получена критическая концентрация мицеллообразования (ККМ).

Ikeda и соавторы измеряли поверхностное натяжение дикалия глицирризината и лаурил сульфата натрия (ЛСН). При выявлении ККМ, ученые получили величину поверхностного натяжения дикалия глицирризината, равную 55,6 Дина/см при концентрации активного вещества 0,72% (8,01 х 1/10³М).

Для ЛСН поверхностное натяжение составило 37,5 Дина/см при концентрации 0,70% (2,43 х 1/10²М). Другими словами, при ККМ приблизительно равной 0,7%, отношение поверхностного натяжения ЛСН к поверхностному натяжению дикалий глицирризината составляет 67,4%. Также провели тест по определению пенообразующей способности дикалий глицирризината и ЛСН, в результате которого выяснили, что пенообразующая способность дикалий глицирризината при рН=5,2 равна 8,45 см, а коэффициент пеногашения – 20,7%. Для сравнения измерили пенообразующую способность и коэффициент пеногашения дикалий глицирризината при рН=10,4. Значения этих величин составили 2,5 см и 60,4% соответственно. Таким образом, в кислой среде пенообразующая способность имеет тенденцию к увеличению, а коэффициент пеногашения к уменьшению.

(2) Противоязвенная активность

В 1946 году датский врач Revers в своем докладе отметил эффективность экстракта лакричника в лечении гастрита и язвы двенадцатиперстной кишки. Данное заявление повлекло за собой целый ряд фармакологических и клинических исследований в Японии и Европе в период с 1950 по 1960 гг.. и привело к накоплению огромного количества данных, касающихся эффективности и безопасности экстракта. В 70-е годы прошлого века Takagi с соавторами заявили, что не только глицирризин (FM100), но и другие фракции активных компонентов лакричника обладают противоязвенной активностью, что в свою очередь также дало толчок для многочисленных исследований активных субстанций лакричника, помимо глицирризина. Как итог всех вышеупомянутых экспериментов, в 1979 г. на фармакологическом рынке появилось новое лекарство для лечения язвенных болезней желудка, представляющее из себя эфир глицирретиновой кислоты и натриевой соли янтарной кислоты.

Предлагаемый нами экстракт лакрицы Zentinamin также прошел терапевтические тесты на эффективность при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта. (Таблица 11, 12)

Таблица 11. Результаты обследования 21 пациента с язвенной болезнью желудка, находящегося на амбулаторном лечении.



Таблица 12. Результаты обследования 4 пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, находящихся на амбулаторном лечении.



(1) Эффект ингибирования высвобождения гистамина

Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на высвобождение гистамина.
Высвобождение гистамина из тучных клеток крыс, вызванное анти-DNP.IgE антителами.

1) Влияние глизирризина и глицирретиновой кислоты на антиген-специфическое высвобождение гистамина.

При добавлении DNP-As антигена к очищенным сенсибилизированным тучным клеткам в конечной концентрации 100 мкг/мл, коэффициент высвобождения гистамина составил 33,3%. Глицирризин ингибировал высвобождение гистамина в концентрации 10 мкг/мл или выше в зависимости от концентрации; уровень ингибирования 83,4% достигался при концентрации глицирризина 1 мг/мл. С другой стороны, максимальный ингибирующий эффект глицирретиновой кислоты (77,6%) достигался концентрацией 50 мкг/мл. При дальнейшем увеличении концентрации глицирретиновой кислоты уровень ингибирования снижался (Рис.1).



Рис.1 Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на высвобождение гистамина тучными клетками крыс при антиген-IgE антитело реакции.

2) Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на высвобождение гистамина вызванное Компаундом 48/80.

При добавлении Компаунда 48/80 к очищенным сенсибилизированным тучным клеткам в конечной концентрации 1 мкг/мл, коэффициент высвобождения гистамина составил 74,0%. Как глицирризин, так и глицирретиновая кислота оказали ингибирующее влияние на высвобождение гистамина. Глицирризин значительно ингибировал высвобождение гистамина, начиная с концентрации 200 мкг/мл и выше; 86,4% ингибирования достигалось при концентрации 2 мг/мл. Что касается глицирретиновой кислоты, максимальный ингибирующий эффект (58,6%) наблюдался при концентрации 500 мкг/мл. При дальнейшем увеличении концентрации степень ингибирования имела тенденцию к снижению. (Рис.2)



Рис.2 Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на высвобождение гистамина тучными клетками крыс, вызванное Компаундом 48/80.

(4) Противовоспалительные эффекты.

1) Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на каскад арахидоновой кислоты
--Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на продукцию Простагландинов (ПГ) и Лейкотриенов (ЛТ) клетками перитонеального экссудата крыс, стимулированную каскадом арахидоновой кислоты.

1. Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на продукцию ЛТB4 клетками перитонеального эксудата крыс.

Как показано на Рис.1, клетки перитонеального эксудата крыс продуцировали ЛТB4 в ответ стимуляцию Са-ионофором А23187. Добавление глицирризина к таким клеткам в различных концентрациях (0,01 – 50 мкг/мл) значительно снижало ЛТB4 продукцию. Добавление глицирретиновой кислоты в концентрации от 5 до 10 мкг/мл также значительно подавляло ЛТB4 продукцию.



Рис.1 Влияние глицирризина на продукцию лейкотриена B4 клетками перитонеального эксудата крыс, стимулированную кальциевым ионофором А23187 (Cal)

1. Влияние глицирризина и глицирретиновой кислоты на продукцию ПГE2 клетками перитонеального эксудата крыс.

Как показано на Рис.2, наблюдалось значительное увеличение продукции ПГE2 при стимуляции Са ионофором А23187. Добавление глицирризина в концентрациях от 10 до 100 мкг/мл значительно снижало ПГE2 продукцию. Добавление глицирретиновой кислоты в концентрации 100 мкг/мл также значительно подавляло ПГE2 продукцию.



Рис.2 Влияние глицирризина на продукцию простагландина E2 клетками перитонеального эксудата крыс, стимулированную кальциевым ионофором А23187 (Cal)




2) Эффект ингибирования активности гиалуронидазы

«Тестируемые вещества»

Дикалий глицирризинат
Индометацин
Хромгликат натрия

«Методика»

1) Реагенты

Гиалуронидаза типа IV-S (Sigma): добавляют буфер, чтобы получить конечную активность фермента 400NF ед/мл

Дикалиевая соль гиалуроновой кислоты (Wako Pure Chemicals): добавляют буфер, чтобы получить конечную концентрацию 0,4 мг/мл

Компаунд 48/80 (Sigma): добавляют буфер, чтобы получить конечные концентрации Компаунда, СаCl2 и NaCl на 0,1 мг/мл, 2,5 мМ и 0,15 М соответственно.

р-диметиламинобензоальдегид (p-DAB) реагент: смешивают p-DAB 10 г, 10N раствора соляной кислоты 12,5 мл, уксусной кислоты 87,5 мл, разбавляют в десять раз уксусной кислотой непосредственно перед использованием.

Раствор борн й кислоты: 50 мл воды добавляют к 4,95 г борной кислоты, затем добавляют 1N раствор гидроксида натрия, чтобы поднять рН до 9,1, после чего доводят водой до 100 мл.

2) Измерение ингибирования фермента.

Samle раствор (растворенный в буфере) 0,2 мл
+
Раствор гиалуронидазы 0,1 мл

37ºС, 20 мин.

+ Раствор активатор 0,2 мл

37ºС, 20 мин.

+ дикалиевая соль гиалуроновой кислоты 0,5 мл

37ºС, 40 мин.

+ 0,4N-NaOH 0,2 мл

лед, 10 мин.

кипятить 3 мин.

лед, 10 мин.

+ p-DAB реагент

37ºС, 20 мин.

Измеряют оптическую плотность при 585 нм

Коэффициент ингибирования (%) рассчитывают по следующей формуле:

Коэффициент ингибирования (%) =

A: Оптическая плотность контрольного раствора при 585 нм (OD585)
B: OD585 холостого раствора
С: OD585 тестируемого раствора
D: OD585 холостого раствора

«Результат»



«Обсуждение»

Ингибирование гиалуронидазы играет важную роль не только в поддержании уровня гиалуроновой кислоты в организме, но также в противовоспалительных и аллергических реакциях. Данный фермент активируется в процессе воспаления и участвует в деструкции матрикса соединительной ткани, повышает проницаемость мембран клеток воспаления и кровеносных сосудов. Гиалуронидаза, присутствующая в тучных клетках, активируется связыванием комплекса антиген-IgE c мембранными рецепторами и вовлекается в процесс высвобождения гистамина из гранул (дегрануляция). До настоящего времени, противовоспалительные препараты (индометоцин, аспирин и т.д.) и противоаллергические (хромгликат, кетотифен, цианидонол, оксатомид и т.д.) считались ингибиторами гиалуронидазы.

Поэтому вещества, способные подавлять активность гиалуронидазы, должны обладать противовоспалительными и антиаллергенными свойствами.

В вышеописанном эксперименте, сравнивали ингибирующее влияние дикалий глицирризината на активность гиалуронидазы с ингибирующим действием противовоспалительного препарата индометацина и противоаллергенного средства хромгликата натрия. Ингибирующая активность дикалий глицирризината оказалась приблизительно в три раза выше, чем у хромогликата натрия, и приблизительно в 11 раз выше, чем у индометацина. Полученные результаты демонстрируют, что дикалий глицирризинат обладает выраженным ингибирующим действием на аллергические реакции первого типа.

В настоящее время широко обсуждается возможность использования дикалий глицирризината в производстве зубных паст. Логическое обоснование такого применения заключается в том, что активность гиалуронидазы в налете десневой борозды и слюне повышается при периодонтальных заболеваниях, т.к. данный фермент высвобождается из лейкоцитов воспаленной ткани десен. Предполагалось, что дикалий глицирризинат ингибирует высвобождение гиалуронидазы и результаты проведенных экспериментов подтвердили эту точку зрения.

3) Влияние на эритему, вызванную ультрафиолетовым облучением.
–Yutaka Ogura, et al.: Pharmaco Metrics, 9(6): 833-894, 1975—

«Тестируемые рецептуры»

1% дикалий глицирризинат в 30% DMSO растворе
2% дикалий глицирризинат в 30% DMSO растворе
3% дикалий глицирризинат в 30% DMSO растворе
2% дикалий глицирризинат в составе мази
Гидрокортизон
Хлорфениламин малеат

«Методики»

С участка кожи (размер: 6 х 8 см) на спине морских свинок* удаляли волосы, после чего три области облучали искусственным ультрафиолетом (1,000W) в течение 40 секунд с расстояния 15 см. Немедленно после облучения на кожу наносили тестируемые составы. Противовоспалительное действие оценивали через 2, 4, 5 и 24 часа после облучения, основываясь на степени выраженности эритемы, согласно выбранной системе баллов:

Эритема с явно выраженной границей: 1.0
Эритема с нечеткими границами: 0.5
Едва заметная эритема: 0

Если суммарный балл трех облученных областей был 2.0 или больше, тестируемый состав считался не эффективным. Если же суммарный бал был 1.5 или меньше тестируемая рецептура считалась эффективной.

* Морские свинки: Для эксперимента использовали самок (STD-Hartley) белых морских свинок весом 330~350 г.

«Результаты»

Дикалий глицирризинат растворяли в 30% DMSO основе и оценивали его противовоспалительное действие. Результаты эксперимента показаны в Таблице 1.

Таблица 1. Противовоспалительное действие дикалия глицирризината на раздражение, вызванное ультрафиолетовым облучением.



Дикалий глицирризинат растворяли в 30% DMSO растворе в концентрациях 1%, 2 % и 3% и наносили на поврежденные участки. Применение 2% и 3% дикалий глицирризината значительно подавляло развитие раздражения. Хотя 1% дикалий глицирризината и оказывал легкий супрессивный эффект на развитие раздражения, его противовоспалительные свойства слабо выражены.

На следующем этапе 2% дикалий глицирризината смешивали с используемой в клинике мазевой основой и сравнивали его противовоспалительное действие с дикалий глицирризинатом, растворенном в 30% DMSO основе. Результаты приведены в Таблице 3.

Таблица 2. Противовоспалительное действие дикалия глицирризината на раздражение, вызванное ультрафиолетовым облучением.



Смешанные с мазью 2% дикалий глицирризината оказывали более сильное супрессивное действие на развитие раздражения, чем дикалий глицирризинат, смешанный с 30% DMSO.

Гидрокортизон и хлорфениламин малеат, используемые в качестве контроля, не производили заметного подавления раздражения.

«Обсуждение»

Противовоспалительную активность дикалий глицирризината оценивали по проницаемости, индуцированной ультрафиолетовым облучением, и назвали эту величину индексом воспаления. В обоих случаях 2% и 3% дикалий глицирризинат, добавленный в базовый раствор, проявил выраженное противовоспалительное действие на эритему, спровоцированную ультрафиолетовым облучением.

На следующем этапе сравнивали противовоспалительную активность 2% дикалий глицирризината в составе 30% DMSO раствора с активностью 2% дикалий глицирризината в мазевой основе. Обе рецептуры обладали заметной противовоспалительной активностью и между ними не было существенной разницы в степени выраженности данного эффекта, но эффект, по-видимому, был слегка выше в случае смешивания с мазевой базой. Ни гидрокортизон, ни хлорфениламин не проявили сколько-нибудь удовлетворительного противовоспалительного действия.

В целом, стероидные противовоспалительные вещества оказали мощное супрессивное влияние на воспаление практически во всех тестах. Их подавляющее действие на механизмы пролиферации сравнимо с другими известными видами противовоспалительных средств. Однако гидрокортизон не показал заметного угнетающего влияния на развитие УФ-эритемы в проведенных экспериментах. Большинство не стероидных противовоспалительных веществ обладают супрессивным действием на экссудативный, а также пролиферативный механизмы, но их активность несколько меньше, чем у стероидов. С другой стороны, противовоспалительные ферменты, введенные перорально, оказались неэффективными почти во всех моделях воспаления, за исключением, легкого супрессивного эффекта, в случае определения проницаемости, как индекса воспаления.

Подводя итог, можно сказать, что противовоспалительные свойства дикалий глицирризината схожи со свойствами противовоспалительных ферментов.

4) Влияние на ДНХБ-контактную сенсибилизацию.
-- Yutaka Ogura, et al.: Pharmaco Metrics, 9 (6): 833-894, 1975—

«Тестируемые рецептуры»
2% дикалий глицирризината в 30% DMSO растворе
2% дикалий глицирризинат в составе мази
Гидрокортизон
Хлорфениламин малеат

«Индуктор воспаления»
2,4-динитрохлорбензен (ДНХБ)

«Методики»
С участка кожи (размер: 2 х 2 см) на спине морских свинок* удаляли волосы. Далее наносили 0,05 мл 1% раствора ДНХБ в этиловом спирте на подготовленный участок кожи. Через 1 час на тот же самый участок наносили тестируемые вещества. Данную процедуру проводили один раз в сутки в течение пяти последующих дней. Спустя шестнадцать дней после начала сенсибилизации, с участка кожи на животе морских свинок удаляли волосы и обрабатывали обезволошенные области 0,05 мл 0,1% раствора ДНХБ в этиловом спирте. Степень выраженности эритемы на брюшной поверхности оценивали через 24 часа согласно выбранной системе баллов.

Критерии оценки:
Отсутствие эритемы: 0
Эритема с нечеткими границами: 0.5
Эритема с явно выраженной границей: 1.0
Эритема, с образованием экссудата и опухоли: 1.5

Полученные результаты подвергали статистическому анализу, чтобы определить статистическое значение разницы между тестируемой и контрольной группами.

* Морские свинки: Для эксперимента использовали самок (STD-Hartley) белых морских свинок весом 330~350 г.

«Результаты»

Результаты проведенного эксперимента приведены в Таблице 1.

2% дикалий глицирризината в 30% растворе DMSO значительно подавляли развитие повреждения. При нанесении дикалий глицирризината в составе мази супрессивного эффекта не наблюдалось.

Таблица 1. Противовоспалительное действие глицирризиновой кислоты на раздражение, вызванное ДНХБ сенсибилизацией.



«Обсуждение»

2% дикалий глицирризината в 30% растворе DMSO демонстрировали выраженный противовоспалительный эффект на развитие повреждения, вызванного ДНХБ сенсибилизацией. При использовании 2% дикалий глицирризината в составе мази никакого противовоспалительного действия не наблюдалось. Полученные результаты позволяют предположить, что используемые основы играют важную роль в проявлении противовоспалительной активности дикалий глицирризината при ДНХБ сенсибилизации.

3. Принцип действияПротивовоспалительная активность

Организм человека постоянно адаптируется к непрерывным изменениям окружающей среды. Помимо обратимых реакций для поддержания гомеостаза, человеческий организм также пытается защитить себя, инициируя необратимые защитные реакции, которые запускаются когда размеры и количество изменений выходят за пределы адаптивности, например, в случае перерождения органических тканей после инвазивных повреждений. Воспаление - одно из таких динамических изменений. В сущности, воспаление – защитная реакция организма в ответ на какое-либо стимулирующее действие или инвазию извне, которые превышают порог приспособляемости. Как правило, лихорадка, болезненность и отек, сопровождающие воспаление оказывают негативное действие на организм, но особенно нежелательны в таких случаях разные функциональные нарушения. Если же соматические реакции оказываются чрезмерными, то воспаление, которое изначально запускается как защитный механизм, может представлять серьезную опасность для жизни.

Кроме того, в некоторых случаях воспаление может продолжаться даже после устранения причины. В таких ситуациях как раз полезно ингибировать воспалительную реакцию. Иными словами, при заболеваниях, ассоциированных с воспалением, рекомендуется ингибировать эту реакцию организма.

Рисунок 6 иллюстрирует метаболизм гидрокортизона (далее по тексту ГК). Yano предположил, что глицирризин (далее Г) и глицирретиновая кислота (далее ГРК) ингибируют восстановление адренокортикальных гормонов и таким образом пролонгируют их жизненный цикл. Затем в ходе ряда экспериментов Yano показал, что Г и ГРК специфично ингибируют восстановление ГК и прогестерона, а также близкие по химическому строению вещества (∆4-3- кетоны) в печеночном гомогенате крыс. Далее он рассчитал, что коэффициент ингибирования в эквимолярных концентрациях для обоих веществ (Г и ГРК) приблизительно равен 60%. (Результаты приведены в Таблице 16 и 17).

Kurabe пошел дальше в изучении вышеописанных эффектов Г и ГРК вплоть до уровня ферментов и коферментов. (Исследование противовоспалительной активности ГРК и производных ГРК; Часть 1; Влияние на метаболизм глюкокортикоидов и микросомальное окисление НАДФ). Метаболизм большинства лекарственных веществ происходит в микросомах печени и включает разнообразные реакции, такие как, окисление, восстановление, гидроксилирование, метилирование, деметилирование, ацетилирование, деэтерификации, присоединения сульфата, глицина и глюкуроновой кислоты. Все эти реакции варьируют в зависимости от биотипа, пола и индивидуальных особенностей. Рисунок 7 демонстрирует ферментную схему окисления, восстановления и гидроксилирования. Данная схема показывает процесс доставки электронов донором электронов НАДФН2 к лекарственным веществам, комплиментарным цитохромому р-450 (гемопротеин с максимумом поглощения 450 нм), посредством ФАД.



Рис 6. Метаболизм гликокортикоидов








Рис.7. Перенос электронов при метаболизме лекарственного средства в микросомах печени.

Сначала, мы подтвердили, что Г, ГРК и 3-сукцинилокси глицирретиновая кислота (ГРК сукцинат) ингибировали восстановление ГК в микросомах печени. Затем, согласно вышеописанному эксперименту, выяснили, что все перечисленные вещества ингибировали активность добавленного НАДФН и явно ингибировали восстановление НАДФН. В присутствии К3 или цитохрома С наблюдалась такая же активность, и восстановление НАДФН ингибировалось в присутствии (обнаруживают по железосодержащему, но не гемо- протеину и образованию флавинового фермента) ФАД пропорционально количеству добавленного ГРК сукцината. Т.к. НАДФН и ГРК являются обоюдно ингибирующими, Г, ГРК и ГРК сукцинат блокируют систему электронного переноса, а именно, перенос электрона от НАДФ к ФАД, и тем самым ингибирует восстановление адренокортикальных гормонов (степень ингибирующей способности убывает в следующем порядке: ГРК сукцинат > ГРК > Г). Вышеописанные процессы демонстрируют на молекулярном уровне механизм противовоспалительного действия Г, ГРК и ГРК сукцината. (В таблице 18 приведены основные выводы из поставленных экспериментов).

Выводы

Влияние глицирретиновой кислоты (А), глицирризиновой (В) и 3-сукцинилокси глицирретиновой кислоты (С) на метаболизм глюкокортикоидов и микросомальное окисление НАДФН.
  • Ингибирование восстановления кортизола и кортикостерона в печеночном гомогенате происходит в порядке: С > В > А
  • Ингибирование НАДФН зависимого метаболизма глюкокортикоидов в 25,000 г диализата в порядке: С > А > В
  • Ингибирование окислительной активности НАДФН в микросомах: С > А > В
  • Окисление НАДФН микросомальным НАДФН специфичным флавопротеином в присутствии К3 или цитохрома С ингибируется в порядке: С > А > В
  • НАДФН и 3-сукцинилокси глицирретиновая кислота, вероятно, конкурируют за НАДФН специфичный флавопротеин.
  • Глицирретиновая кислота и структурно похожие на нее вещества ингибируют катаболизм НАДФ-связанного глюкокортикоида посредством блокировки электронного переноса в микросомах, чем и объясняется противовоспалительная активность.
На следующем этапе Kurabe попытался провести серию экспериментов, отталкиваясь от абсолютно иной точки зрения, Часть II “влияние окислительно-восстановительных компонентов на митохондриальную дыхательную цепь”. Т.е. было высказано предположение, что противовоспалительная активность связана с нижеуказанными процессами:

(1) Ингибирование гиалуронидазы,
(2) Ингибирование фибринолизина,
(3) Ингибирование гистидин декарбоксилазы,
(4) Ингибирование эстеразы,
(5) Ингибирование действия брадикинина,
(6) Ингибирование реакций антиген-антитело,
(7) Ингибирование калликреина плазмы,
(8) Усиление гипоталамо-адренокортикальной функции,
(9) Ингибирование метаболизма и экскрекции глюкокортикоидов,
(10) Ингибирование синтеза, высвобождения и активности биогенных аминов, таких как гистамин, серотонин и т.д.,
(11) Стабилизация эпинефринных мембран и ингибирование высвобождения и активности лизоцима.

К приведенному выше списку также можно добавить ингибирование энергетического обмена, ингибирование синтеза АТФ и окислительного фосфорилирования.

Например, хорошо известно, что синтез иммуноглобулинов лимфатической тканью в очаге воспаления приводит к потреблению АТФ, НАДФ и НАДФН. Затем было подтверждено, что салицилаты и бутадион угнетают митохондриальную дыхательную систему и окисление сукцината. Вместе с тем, совершенно очевидно, что энергия реакции разобщения окислительного фосфорилирования и противовоспалительная активность находятся в определенном соотношении.

На рис.8 показана схема реакций окислительного фосфорилирования в митохондриальной дыхательной цепочке. В Части II Kurabe показывает, что противовоспалительные средства, такие как Г, ГРК, ГРК сукцинат, салицилат, антипирин и похожие вещества ингибируют ферменты, катализирующие восстановление НАДФН до цитохрома С. Помимо этого, вышеуказанные вещества также ингибируют ферменты, катализирующие восстановление коэнзима Q до цитохрома С. Механизм такого ингибирования зависит от концентрации коэнзима Q, а т.к. ГРК сукцинат ингибирует цитохром С-редуктазу, можно предположить, что3-сукцинилокси глицирретиновая кислота является антагонистом коэнзима Q.

Таким образом, Kurabe пришел к заключению, что упомянутые выше различные вещества специфически ингибируют перенос электронов от коэнзима Q к цитохрому С в митохондриальной дыхательной цепи и посредством этого блокируют доставку энергии для развития воспалительной реакции, выполняя функцию разобщителя окислительного фосфорилирования. (В таблице 19 представлены только выводы)



Рис.8. Перенос электронов и окислительное фосфорилирование системы дыхательных ферментов.

Таблица 19. Заключение.

Влияние глицирретиновой кислоты и сходных противовоспалительных веществ на транспорт электронов в дыхательной цепи.

1) Противовоспалительные вещества, такие как глицирретиновая кислота, 3-сукцинилокси глицирретиновая кислота, глицирризин, салицилат и антипирин, по-видимому, не влияли на НАДФН-менадион (коэнзим Q) редуктазу.
2) Все перечисленные противовоспалительные средства ингибировали НАДФН-цитохром С редуктазу и сукцинат-цитохром С редуктазу. 3-сукцинилокси глицирретиновая кислота и похожие вещества (в низких концентрациях) заметно ингибировали активность ферментов.
3) Восстановленная СоQ-цитохром С редуктаза также ингибировалась перечисленными противовоспалительными веществами. Механизм ингибирования 3-сукнилокси глицирретеновой кислотой, видимо, представляет из себя конкурентное связывание восстановленной СоQ-цитохром С редуктазы с (СоQ)H2 и 3-сукцинилокси глицирретиновой кислотой.
4) С другой стороны, все упомянутые противовоспалительные вещества увеличивали активность цитохром оксидазы в тех же концентрациях, в которых ингибировали восстановленную СоQ-цитохром С редуктазу.
Полученные результаты означают, что основное действие салицилата, антипирина, глицирризина, глицирретиновой кислоты и 3-сукцинилокси глицирретиновой кислоты сводится к специфическому ингибированию системы переноса электронов между коэнзимом Q и цитохромом С.
5) Ингибирование (салицилатом и антипирином) электронного переноса в дыхательной цепи между коэнзимом Q и цитохромом С требует высоких концентраций субстрата, хотя глицирретиновая кислота, глицирризин и 3-сукцинилокси глицирретиновая кислота обеспечивают эффективное ингибирующее действие даже в низких концентрациях. В частности противовоспалительная активность глицирретиновой кислоты основана на метаболическом контроле источника энергии для воспалительной реакции.

  • Глицирризин корней лакричника. Исследования японских ученых. Часть 1

Рекомендуемые товары

- +
10рублей

Теги: ароматерапия, компоненты для косметики,